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Precision for Medicine
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ÉTUDE DE CAS

Caractérisation des mutations spécifiques de l'EGFR dans les CTC isolées par ApoStream® chez les patients atteints de CBNPC

Application clinique : Exploration des CTC comme alternative aux échantillons de biopsie tissulaire pour surveiller les mutations en vue de l'optimisation de la thérapie ciblée

Mots clés : CTCs , ApoStream®, LSC, analyse mutationnelle, étude corrélative, NSCLC

Contexte : Les cellules tumorales circulantes sont souvent présentées comme un substitut potentiel aux biopsies tissulaires lorsqu'il s'agit d'étudier la biologie du cancer d'un patient. L'obtention d'échantillons de biopsie est un processus invasif et n'est pas toujours possible en fonction de l'état du cancer du patient. L'accès à un mécanisme sanguin de compréhension de la biologie des tumeurs séduit de nombreux cliniciens ; cependant, de nombreuses recherches doivent encore être menées pour établir la pertinence clinique des CTC en tant que véritable alternative à la biopsie. Cette étude a été structurée de manière à examiner cette affirmation. Des CTC ont été isolées à partir du sang de patients atteints de cancer du poumon non à petites cellules à l'aide d'ApoStream®, et le statut des exons 19 et 21 du gène EGFR a été examiné au moyen de la PCR ICE-COLD. Les résultats de cette analyse mutationnelle ont ensuite été comparés à l'analyse mutationnelle effectuée sur des échantillons de biopsie du même patient.

Méthodes : Deux tubes de sang ont été prélevés sur 36 patients atteints de CBNPC et les CTC ont été enrichies à partir de chacun d'eux à l'aide d'ApoStream®. Après la capture, les CTC d'un tube ont été placées sur des lames et colorées pour la cytokératine (CK), le CD45 et le DAPI. Les cellules colorées ont été analysées par cytométrie à balayage laser (LSC) et les cellules présentant un phénotype CK+/CD45-/DAPI+ ont été dénombrées comme CTC ; les autres phénotypes examinés comprenaient les cellules CK-/CD45-/DAPI+ et CK+/CD45+/DAPI+. L'ADN a été extrait des cellules du deuxième tube, puis soumis à la PCR ICE-COLD pour analyser le statut mutationnel du gène EGFR, et les résultats ont été comparés à l'analyse mutationnelle effectuée sur des échantillons de biopsie archivés.

Les résultats ont été comparés à l'analyse mutationnelle effectuée sur des échantillons de biopsie archivés :

Résultats de l'Apostream

Figure 1 : Résultats d'ApoStream®. Résultats de l'ApoStream® Les numérations médianes des CTC et des CTC putatifs (CK- /CD45-, CK+/CD45+) sont rapportées ici. Des échantillons de donneurs sains (n=3) ont également été analysés ; les CTC n'ont été détectées dans aucun des échantillons. Des numérations comparativement faibles ont été obtenues pour les cellules CK-/CD45- (médiane : 107, intervalle : 28 - 457) et CK+/CD45+ (médiane : 15, intervalle : 7 - 26).

Analyse des mutations de l'EGFR
Figure 2 : Résultats de l'analyse mutationnelle de l'EGFR par PCR ICE-COLD. Résultats de l'analyse mutationnelle de l'EGFR par ICE-COLD PCR L'utilisation de l'ICE COLD-PCR couplée au séquençage Sanger a permis de détecter les mutations des exons 19 et 21 de l'EGFR dans les CTC isolées par ApoStream®. Des mutations de l'exon 21 ont été identifiées dans les CTC de 100 % des patients dont le tissu était positif. Des modifications de la méthode ont permis d'augmenter la sensibilité de la détection des mutations de l'exon 19 de l'EGFR dans les CTC provenant de patients dont le tissu est positif.
CTC de patients dont les tissus étaient positifs, passant de 0 % avec la COLD-PCR ICE standard à 27 % et 50 % avec les méthodes 2A et 2B. Seule une partie de la matrice extraite a été testée par PCR, ce qui a pu conduire à des résultats divergents.
ce qui a pu conduire à des résultats divergents.

Impact :
ApoCell a démontré qu'ApoStream® est capable d'isoler avec succès les CTC et les CTC putatives dans le sang de patients atteints de NSCLC. L'analyse des mutations de l'EGFR et la comparaison avec les données sur les mutations provenant de biopsies tissulaires permettent d'explorer l'utilité clinique des CTC comme alternative à la biopsie tissulaire.

Référence : Roarty EB, et al. "Characterization and Identification of Specific EGFR Mutations in Circulating Tumor Cells (CTCs) Isolated from NSCLC Patients Using an Antibody-Independent Method, ApoStream® : An Update Report". NCI-AACR-EORTC 2013.