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Precision for Medicine
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Essais d'occupation des récepteurs par cytométrie en flux

Comprendre comment vos produits biothérapeutiques s'attaquent à leurs cibles

Les essais d'occupation des récepteurs (RO) sont couramment utilisés pour mesurer les données pharmacodynamiques (PD). Ces tests ont un large éventail d'utilisations dans les essais précliniques et les premiers stades des essais cliniques, jusqu'aux stades ultérieurs. Les données pharmacodynamiques peuvent ensuite être mises en corrélation avec les profils pharmacocinétiques afin d'établir des relations pharmacocinétiques/pharmacodynamiques et d'orienter la prise de décision en matière de dosage.

Guidez la prise de décision à chaque phase grâce aux essais RO

Precision fournit des services de cytométrie en flux à partir de plusieurs laboratoires aux États-Unis et en Europe. Pour rationaliser les projets, Precision propose également des kits personnalisés pour la collecte des échantillons, un réseau mondial de laboratoires de traitement des échantillons et des services logistiques pour acheminer rapidement les échantillons vers les laboratoires d'analyse.

Les essais RO sont validés pour l'utilisation prévue et conviennent pour la preuve de concept, les essais cliniques exploratoires, secondaires ou primaires.

Préclinique et découverte :

  • Sélection optimale de la matrice : sang total ou sang total fixé
  • Spécificité du réactif déterminée par une caractérisation approfondie au cours du développement de l'essai
  • Guide de sélection des composés

Essais de phase précoce :

  • Mesurer la pharmacodynamique des biomarqueurs d'intérêt
  • Évaluer l'efficacité

Essais de phase tardive :

  • Définir les caractéristiques pharmacodynamiques de la population de l'agent biothérapeutique
  • Combiner les données avec les profils pharmacocinétiques pour guider le dosage et les schémas d'administration

Formats courants pour les essais de cytométrie en flux de l'occupation des récepteurs

Consultez Precision pour décider de cette étape critique du développement de l'essai RO. Le choix du format de l'essai dépend largement du mécanisme d'action (MOA) du médicament et de la disponibilité des réactifs.

Essais sur les récepteurs libresÉvaluation directe du récepteur liéEssai sur les récepteurs totauxEssai de modulation des récepteursEssai d'occupation fonctionnelle des récepteurs
Fonction Mesurer les récepteurs non liés ou non occupés sur une cellule en utilisant un anticorps non marqué et un anticorps thérapeutique concurrent ou un anticorps conjugué à un médicament. Mesurer les anticorps thérapeutiques liés au récepteur à l'aide d'un réactif de détection d'anticorps antithérapeutiques. Mesurer la liaison d'un anticorps thérapeutique à son site récepteur et l'associer à la liaison d'un autre anticorps qui se lie à un site différent sur le même récepteur. Mesurer l'effet de la liaison de l'anticorps thérapeutique sur la fonction du récepteur cible Mesurer les effets biologiques de la liaison de l'anticorps thérapeutique au récepteur cible
Signification clinique Généralement utilisé pour les médicaments thérapeutiques antagonistes qui bloquent la liaison du ligand au récepteur. Souvent utilisé lorsque des anticorps monoclonaux dirigés contre le récepteur ne sont pas facilement disponibles ou que la conjugaison de la thérapie elle-même peut compromettre la liaison à son récepteur cible. Utile lorsque le niveau des récepteurs ou le nombre de cellules peut changer au fil du temps. Élimination des récepteurs ou inhibition/activation de l'internalisation des récepteurs au fil du temps ou avec l'augmentation de la dose de médicament Prolifération cellulaire ou production de cytokines, pouvant avoir des implications sur la sécurité et l'efficacité des médicaments
Illustration

Free receptor assay

Direce assessment

Total receptor occupancy

Measure effect of the therapeutic antibody binding on the function of the target receptor Measure biological effects of the therapeutic antibody binding to the target receptor
Function Measure unbound or unoccupied receptors on a cell using an unlabeled antibody and competing therapeutic antibody or drug-conjugated antibody Measure therapeutic antibodies bound to the receptor with an anti-therapeutic antibody detection reagent Measure binding of a therapeutic antibody to its receptor site and couple with binding of an alternative antibody that binds to a different site on the same receptor Receptor shedding or inhibition/activation of receptor internalization over time or with increasing drug dose Cell proliferation or cytokine production, which may have implications in drug safety/efficacy
Clinical Significance Typically used for antagonistic therapeutic drugs that block ligand binding to the receptor Often applied when monoclonal antibodies to the receptor are not readily available or conjugation of the therapeutic itself may compromise binding to its receptor target Useful where receptor level or cell numbers can change over time
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Free receptor assay

Direce assessment

 

Total receptor occupancy

 

Questions fréquemment posées

Quelle phase clinique peut bénéficier de la cytométrie en flux d'occupation des récepteurs ?

Vérification préclinique de la cible et du mode d'action : Il est essentiel de déterminer le RO tout au long du développement, car bon nombre de ces produits biologiques ont une longue demi-vie. La compréhension de leurs caractéristiques de liaison peut avoir un impact sur la sélection du composé principal.

Phase 1 : En règle générale, cette classe de médicaments est très puissante et des protocoles de dosage inappropriés peuvent entraîner des effets secondaires graves, voire mortels. L'identification des doses de départ du modèle d'effet biologique minimal anticipé (MABEL) ou des doses pharmacologiquement actives (PAD) peut nécessiter des évaluations RO en conjonction avec la PD et la PK afin d'orienter de manière appropriée les protocoles de dosage.

Phase 2 : Efficacité des protocoles de dosage et d'administration pour aider à prédire les niveaux de RO et si le récepteur est modulé à la hausse ou à la baisse sur les cellules qui sont engagées par le biothérapeutique.

Phase 3 : PD de la population pour les études de sécurité et d'efficacité à long terme.

Quel est le niveau réglementaire requis pour un panel clinique de cytométrie de flux ?

Les essais de cytométrie en flux sont validés et utilisés dans le cadre d'une approche adaptée à l'objectif visé. Les paramètres inclus dans la validation d'un essai doivent toujours dépendre de l'objectif de l'essai.

Quels sont les défis posés par les essais d'occupation des récepteurs ?

Étant donné que les tests RO sont généralement effectués sur du sang total en temps réel et peuvent être réalisés sur des PBMC, la stabilité des échantillons doit être prise en considération.

Considérations relatives à la stabilité :

  • Durée d'expédition du sang du site au laboratoire : l'âge du sang influe sur la qualité des résultats.
  • Où se trouve le site et combien de temps durera l'expédition des échantillons ?
  • L'utilisation de tubes de collecte de fixateurs stabilisants (Smart Tube, Transfix, CytoChex) peut être envisagée.
  • Le récepteur cible est-il compatible avec le fixateur ?
  • Pendant combien de temps les échantillons fixés sont-ils stables pour les tests ?

Autres considérations :

  • Disponibilité d'anticorps concurrents ou non concurrents de la cible
  • Modulation du récepteur après le traitement

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